Genética molecular de la hemofilia

GENÉTICA MOLECULAR DE LA HEMOFILIA

En la era genómica, el Laboratorio de Genética Molecular de la Hemofilia (LabGMH) se enfoca a solucionar problemas prácticos en genética humana y a estudiar los mecanismos moleculares que relacionan el genotipo, y epigenotipo, con el fenotipo clínico observado en mujeres y varones de la población humana. Con este objetivo, el LabGMH toma como modelo experimental a la Hemofilia A (HA) y B (HB), coagulopatías ligadas al X paradigmáticas que afectan 1 en 5 y en 30 mil varones nacidos, respectivamente. El LabGMH también estudia desde sus inicios las relaciones genotipo-fenotipo en mujeres. Si bien el número de mujeres con expresión neta de hemofilia es menor al referido, las portadoras (cuyo número más que duplica al de varones afectados), sufren una sintomatología hematológica casi siempre desatendida, aún en sistemas sanitarios con recursos suficientes, creando un problema médico que debe ser corregido.

Las características dispares de los genes del F8 (HA) y del F9 (HB) son plataformas ideales para desarrollar nuevas técnicas de análisis genético; y los diversos factores modificadores de la expresión de desórdenes ligados al X recesivos disponen un modelo alineado a proveer las claves genotípicas para entender y predecir la respuesta de cada paciente ante eventos espontáneos o terapéuticos de su vida. Además, el LabGMH provee a la comunidad de familias con Hemofilia de Sudamérica con diagnóstico genético de alta calidad internacional desde 1995.

Director: Dr. Carlos De Brasi
Investigador Independiente de CONICET

Email: cdebrasi@hematologia.anm.edu.ar

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Co Directora: Dra. Liliana Rossetti
Investigadora Independiente de CONICET

Email: lilianarossetti@yahoo.com.ar

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Investigadores

Becarios

Líneas de investigación

Relaciones genotipo-fenotipo en Hemofilia. Bases genéticas del desarrollo de inhibidor, de respuesta de inducción de tolerancia inmune, de ensayos discordantes de FVIII: C.

Marchione VD, Radic CP, Ziegler B, De Brasi CD, Rossetti LC.

En hemofilia A y B (HA y HB) el fenotipo hemofílico está mayormente determinado por el genotipo del F8 y F9, respectivamente, observándose formas de expresión severas, moderadas y leves, según la actividad del factor de coagulación. Más

Mecanismos de Expresión de trastornos ligados al X en mujeres (portadoras de Hemofilia como modelo). Inactivación sesgada del X: causas, respuesta bifásica y fenotipo vs especificidad tisular.

Ziegler B, Rossetti LC, De Brasi CD, Radic CP.

Como enfermedad ligada al X recesiva, la hemofilia se manifiesta en el varón hemicigota y no en la mujer heterocigota. Sin embargo, existen varios reportes de mujeres portadoras heterocigotas con hemofilia como consecuencia de la inactivación sesgada extrema del cromosoma X sobre el alelo normal del F8 o F9. Más

Variantes estructurales del genoma humano: lecciones de la hemofilia. Análisis de los mecanismos de origen, caracterización de rupturas y bioinformática de las secuencias implicadas.

Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD.

La hemofilia A (HA) y B (B) son coagulopatías ligadas al cromosoma X recesivas, cuya máxima severidad clínica es causadas en gran porcentaje por variantes estructurales (SV) que causan HA severa, como la inversión del intrón 22 (Inv22), del intrón 1 (Inv1) (40-50%) o grandes deleciones del F8 (8-15%), y las asociadas a HB severa, como las grandes deleciones del F9 (3-10%). Más

Genotipado masivo de variantes estructurales por análisis de secuencias en cis yuxtapuestas en los círculos de restricción. Selección física de regiones blanco y desarrollo de nuevos algoritmos ad hoc.

Abelleyro MM, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD.

En el Lab-GMH fueron desarrollados numerosos abordajes de análisis genómico. Entre ellas, en 2004 se diseñó, desarrolló y validó el método de análisis de la Inv22 por inverse shifting-PCR (IS-PCR) actualmente de elección en la mayoría de los laboratorios de hemofilia del mundo. Más

Publicaciones

Pio MG, Siffo S, Scheps KG, Molina MF, Adrover E, Abelleyro MM, Rivolta CM, Targovnik HM. Curating the gnomAD database: Report of novel variants in the thyrogobulin gene using in silico bioinformatics algorithms. Molecular and Celular Endocrinology. 2021 Aug 20;534:111359. doi: 10.1016/j.mce.2021.111359.
Gutiérrez LG*, Abelleyro MM*, Ruiz MS, Anchordoqui MS, Freitas J, Bianchini M, De Brasi CD*, Larripa IB* (*equal contribution). Development of an inverse-PCR approach for characterization of the major BCR-ABL1 breakpoint sequences on genomic DNA: proof of concept. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2021 Jun 23. doi: 10.1515/cclm-2020-1482.
Luce L*, Abelleyro MM*, Carcione M, Mazzanti C, Rossetti LC, Radic CP, Szijan I, Menazzi S, Francipane L, Nevado J, Lapunzina P, De Brasi CD*, Giliberto F* (*equal contribution). Analysis of complex structural variants in the DMD gene in one family. Neuromuscular Disorders 2021; 31(3): 253-63. doi: 10.1016/j.nmd.2020.11.015. ISSN: 0960-8966.
Woods AI, Rossetti LC, Paiva J, De Brasi CD, Romero ML, Casinelli MM, Blanco AN, Sánchez-Luceros A. Type 2N von Willebrand disease: Is it always a recessive trait? Thrombosis Research 2021; 198: 49-51. doi: 10.1016/j.thromres.2020.11.029.
Srivastava A, Santagostino E, Dougall A, Kitchen S, Sutherland M, Pipe SW, Carcao M, Mahlangu J, Ragni MV, Windyga J, Llinás A, Goddard NJ, Mohan R, Poonnoose PM, Feldman BM, Lewis SZ, van den Berg HM, Pierce GF; WFH Guidelines for the Management of Hemophilia panelists and co-authors* (*Al Sharif A, Baarslag MA, Bagley L, Berntorp E, Blamey G, Brooker M, de Paula Careta F, Chew K, Coffin D, De Brasi CD, de Kleijn P, Dolan G, Dumez V, Duport G, Ettingshausen CE, Golob MM, Gouider E, Henry LT, Hum D, Jackson M, Kaczmarek R, Khair K, Konkle BA, Ljung RCR, Montalvão SA, Nedzinskas A, O’Hara S, Ozelo MC, Pasta G, Preza-Hernández DE, Rayner B, Robinson F, Sathyanarayanan R, Schofield TJ, Selvaggi A, Shetty S, Sostack M, Street A, Suwantaroj E, Tagny CT, Toulon P). WFH Guidelines for the Management of Hemophilia, 3rd edition. Haemophilia 2020 Aug;26 Suppl 6:1-158. // Sutherland M, De Brasi CD, Konkle BA, Shetty S, Pierce GF, Srivastava A. Chapter 4: Genetic Assessment. Haemophilia 2020; 26(6):49-58. doi: 10.1111/hae.14046
Abelleyro MM, Radic CP, Marchione VD, Waisman K, Tetzlaff T, Neme D, Rossetti LC, De Brasi CD. Molecular insights into the mechanism of non-recurrent F8 structural variants: full breakpoint characterization and bioinformatics of DNA elements implicated in the upmost severe phenotype in Hemophilia A. Human Mutation 2020, 41(4):825-36. doi: 10.1002/humu.23977.
Panek CA, Bruballa AC, Pineda GE, De Brasi C, Fernández-Brando RJ, Mejías MP, Ramos MV, Palermo MS. Cytokines use different intracellular mechanisms to upregulate the membrane expression of CX3CR1 in human monocytes. Molecular Immunology 2019, 108:23-33. doi: 10.1016/j.molimm.2019.01.003.
Ferri C, Weich N, Gutiérrez L, De Brasi CD, Bengió MR, Zapata P, Fundia A, Larripa I. Single nucleotide polymorphism in PTEN-Long gene: A risk factor in chronic myeloid leukemia. Gene 2019, 694: 71-5. doi: 10.1016/j.gene.2019.01.038. ISSN: 0378-1119.
Abelleyro MM*, Marchione VD*, Palmitelli M, Radic CP, Neme D, Larripa IB, Medina-Acosta E, De Brasi CD*, Rossetti LC* (* equal contribution). Inverse PCR to perform long-distance haplotyping: main applications to improve preimplantation genetic diagnosis in hemophilia. European Journal of Human Genetics 2019; 27(4): 603-11. doi: 10.1038/s41431-018-0334-9.
Scheps K, Meyer C, Bestach Y, Enrico A, Bengió R, Rodríguez-Zubieta M, Rivas M, De Brasi CD, Larripa I. Identification of driver and subclonal mutations in ASXL1 and IDH1/IDH2 genes in an Argentine series of patients with myelofibrosis. International Journal of Laboratory Hematology 2018, 40(4):e82-e86. doi: 10.1111/ijlh.12847.
Abelleyro MM*, Marchione VD*, Elhelou L, Radic CP, Rossetti LC, Neme D, De Brasi CD. (* equal contribution). Somatic/germinal mosaicism of a F8 promoter deletion confounds clinical predictions in a family with haemophilia A: key role of genotype quantitation. Thrombosis and Haemostasis 2018, 118(3):617-20. doi: 10.1055/s-0038-1623536.
Almejún MB, Borge M, Colado A, Elías EE, Podaza E, Risnik D, De Brasi CD, Stanganelli C, Slavutsky I, Cabrejo M, Fernández-Grecco H, Bezares RF, Cranco S, Burgos RÁ, Sánchez-Ávalos JC, Oppezzo P, Giordano M, Gamberale R. Sphingosine kinase 1 participates in the activation, proliferation and survival of chronic lymphocytic leukemia cells. Haematologica 2017, 102(7): e257-e260. doi: 10.3324/haematol.2017.167353.
Marchione VD, Zuccoli JR, Abelleyro M, Radic CP, Neme D, Candela M, de Tezanos Pinto M, De Brasi CD, Rossetti LC. A prevalent CTLA4 missense variant significantly associates with inhibitor development in Argentine patients with severe haemophilia A. Haemophilia 2017, 23(2): e166-e169. doi: 10.1111/hae.13194.
Abelleyro MM, Rossetti LC, de Los Ángeles Curto M, Radic CP, Marchione VD, De Brasi CD. F8 intron 22 inversions and SNP rs73563631 in unrelated families with severe haemophilia A: clinical features and gene testing implications. Thrombosis and Haemostasis 2016, 115(3): 678-81. doi: 10.1160/TH15-08-0643.
Abelleyro MM, Radic CP, Tetzlaff T, Marchione V, Fundia AF, Larripa IB, Rossetti LC, De Brasi CD. Reliable and cost-effective approach for diagnosis of heterozygous F8/F9 large deletions by quantitative real-time PCR. Haemophilia 2015, 21(3): e247-51. doi: 10.1111/hae.12656.
Radic CP, Rossetti LC, Abelleyro MM, Tetzlaff T, Candela M, Neme D, Sciuccati G, Bonduel M, Medina-Acosta E, Larripa IB, de Tezanos Pinto M, De Brasi CD. Phenotype-genotype correlations in haemophilia A carriers are consistent with the binary role of the phase between F8 and X-chromosome inactivation. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2015, 13(4): 530-9. doi: 10.1111/jth.12854.

PUBLICACIONES CIENTÍFICAS EN REVISTAS NO INDEXADAS.

Vega-Requena Y, Faguaga M, Abelleyro M, De Brasi C, Bandinelli E, Sans M, Hidalgo P. Inversión de los intrones 1 y 22 del F8 en pacientes con Hemofilia A Severa del Noreste de Uruguay. Archivos de Pediatría del Uruguay 2020, 91(2): 84-9. ISSN 0004-0584.
Marchione VD, Radic CP, Abelleyro MM, Primiani L, Neme D, Candela M, de Tezanos Pinto M, De Brasi CD, Rossetti LC. El polimorfismo CTLA4Thr17Ala (c.49A>G) se asocia con el desarrollo de inhibidor en pacientes argentinos con hemofilia A severa. Hematología. Vol 20 Nro 3 – septiembre-diciembre 2016: 292-7. Ed. Sociedad Argentina de Hematología. CABA Argentina. ISSN: 0329-0379.

PRODUCCIÓN TECNOLÓGICA PUBLICADA.

NCBI-GeneBank Nucleotide Sequences: “Catalog of F8 and F9 genomic rearrangements in severe Hemphilia A”

GenBank nucleotide sequence. Accession: MT657364.1 GI: 2035121857. Homo sapiens clone C#1 Xq26.3-q27.2 translocation breakpoint region genomic sequence. Radic CP, Abelleyro MM, Marchione VD, Ziegler BM, Waisman K, Rossetti LC. De Brasi C D. 925 bp linear DNA. May.2021.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MT657363.1 GI: 2035121856. Homo sapiens clone C#2 Xq27.1-q27.2 translocation breakpoint region genomic sequence. Radic CP, Abelleyro MM, Marchione VD, Ziegler BM, Waisman K, Rossetti LC. De Brasi C D. 680 bp linear DNA. May.2021.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MT657362.1 GI: 2035121855. Homo sapiens clone C#3 Xq27.1 translocation breakpoint region genomic sequence. Radic CP, Abelleyro MM, Marchione VD, Ziegler BM, Waisman K, Rossetti LC. De Brasi C D. 863bp linear DNA. May.2021.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124165.1 GI: 1407507562. Homo sapiens clone Case#U2 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 573 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124164.1 GI: 1407507561. Homo sapiens clone Case#949 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 1,124 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124163.1 GI: 1407507560. Homo sapiens clone Case#945 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 848 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124157.1 GI: 1407507554. Homo sapiens clone Case#132 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 322 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124156.1 GI: 1407507553. Homo sapiens clone Case#121 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 619 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124155.1 GI: 1407507552. Homo sapiens clone Case#51 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 782 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124162.1 GI: 1407507559. Homo sapiens clone Case#617 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 945 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124161.1 GI: 1407507558. Homo sapiens clone Case#577 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 945 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124160.1 GI: 1407507557. Homo sapiens clone Case#575 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 728 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124159.1 GI: 1407507556. Homo sapiens clone Case#467 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 971 bp linear DNA. Jun.2018.
GenBank nucleotide sequence. Accession: MH124158.1 GI: 1407507555. Homo sapiens clone Case#326 F8 breakpoint region genomic sequence. Abelleyro MM, Marchione VD, Radic CP, Rossetti LC, De Brasi CD. 720 bp linear DNA. Jun.2018.

Comunicación

SERVICIOS

El Laboratorio de Genética Molecular de la Hemofilia ofrece el Diagnóstico de la mutación causal de la hemofilia, para pacientes con hemofilia A severa (FVIII:C<1UI/dl) y familiares en riesgo de familias informativas se ofrece el diagnóstico de la inversión del intrón 22 (Inv22) e inversión del intrón 1 (Inv1) del F8 mediante la aplicación de la técnica denominada inverse shifting-PCR (desarrollada en nuestro laboratorio). Aquellos pacientes con hemofilia A no informativos para la Inv22 e Inv1 y también a los pacientes con hemofilia B son luego estudiados mediante la técnica de screening CSGE (conformation sensitive gel electrophoresis) con productos de amplificación que corresponden a todas las regiones codificantes, exones y secuencias flanqueantes para estudiar regiones de splicing, región promotora y de poliadenilación; con posterior secuenciación automática de Sanger del producto de amplificación que presenta patrón anómalo. Estos servicios son ofrecidos por el Instituto de Investigaciones Hematológicas (IIHEMA) de la ANM, por convenio CONICET/ANM. En conclusión, el Lab GMH ofrece la caracterización de la variante causal en pacientes/familias con hemofilia A o B de todo el país y de la región.